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T33-22A 小鼠雜交瘤細(xì)胞簡介

起源與背景

細(xì)胞特性

1. 生長特性
   • 永生性：繼承骨髓瘤細(xì)胞的無限增殖能力，可在體外培養(yǎng)基中持續(xù)傳代培養(yǎng)，適合大規(guī)模生產(chǎn)單克隆抗體。
   • 貼壁或懸浮生長：雜交瘤細(xì)胞的生長方式因克隆而異，部分呈懸浮生長（類似淋巴細(xì)胞），部分可能輕微貼壁，需根據(jù)具體培養(yǎng)條件優(yōu)化。
   • 營養(yǎng)需求：通常需在含胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)（如 RPMI 1640 或 DMEM），并添加抗生素（如青霉素、鏈霉素）防止污染。部分細(xì)胞可能依賴特定添加劑（如次黃嘌呤 - 氨基蝶呤 - 胸腺嘧啶核苷，HAT）以篩選雜交瘤細(xì)胞。
2. 功能特性
   • 單克隆抗體分泌：T33-22A 細(xì)胞可穩(wěn)定分泌針對(duì)特定抗原的單克隆抗體，其抗原特異性取決于融合前免疫小鼠所使用的抗原（如腫瘤相關(guān)抗原、細(xì)胞因子等）。
   • 純度與均一性：雜交瘤細(xì)胞經(jīng)過克隆化篩選（如有限稀釋法），確保單一細(xì)胞來源，因此分泌的抗體具有高度均一的抗原結(jié)合位點(diǎn)和生物學(xué)活性。

培養(yǎng)與保存

1. 培養(yǎng)條件
   • 溫度與氣體環(huán)境：37℃恒溫培養(yǎng)箱，含 5% CO?的濕潤環(huán)境，維持培養(yǎng)基 pH 穩(wěn)定。
   • 傳代策略：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 80%~90% 時(shí)需傳代，避免過度生長導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或抗體分泌能力下降。傳代比例通常為 1:3~1:5，具體需根據(jù)細(xì)胞生長速度調(diào)整。
   • 污染監(jiān)測：定期觀察細(xì)胞形態(tài)（如是否出現(xiàn)懸浮死細(xì)胞增多、培養(yǎng)基渾濁），并通過支原體檢測等手段確保無菌狀態(tài)。
2. 凍存與復(fù)蘇
   • 凍存方法：對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞經(jīng)胰酶消化（若貼壁）或離心收集后，用含 10% DMSO、20% FBS 的培養(yǎng)基重懸，按每管 1×10?~5×10?細(xì)胞分裝，程序降溫后液氮保存。
   • 復(fù)蘇要點(diǎn)：快速解凍（37℃水浴），輕柔離心去除凍存液，避免 DMSO 對(duì)細(xì)胞的毒性，及時(shí)更換新鮮培養(yǎng)基。

應(yīng)用領(lǐng)域

1. 單克隆抗體制備
   T33-22A 細(xì)胞的核心應(yīng)用是生產(chǎn)單克隆抗體，可用于：
   • 基礎(chǔ)研究：如抗原 - 抗體相互作用機(jī)制、細(xì)胞信號(hào)通路研究。
   • 診斷試劑開發(fā)：作為 ELISA、免疫組化（IHC）、流式細(xì)胞術(shù)（FACS）等檢測方法的特異性抗體來源。
   • 靶向治療研究：若抗體針對(duì)腫瘤抗原，可進(jìn)一步改造為治療性抗體（如 ADC 藥物、免疫毒素等）。
2. 免疫相關(guān)研究
   利用其分泌的抗體可探究免疫系統(tǒng)對(duì)特定抗原的應(yīng)答機(jī)制，或用于中和實(shí)驗(yàn)（如阻斷細(xì)胞因子活性）。
3. 生物制藥與工業(yè)生產(chǎn)
   通過大規(guī)模培養(yǎng)（如生物反應(yīng)器）或小鼠腹腔注射制備腹水，實(shí)現(xiàn)單克隆抗體的批量生產(chǎn)，為臨床前研究或工業(yè)級(jí)試劑提供原料。

注意事項(xiàng)

• 特性穩(wěn)定性：長期傳代可能導(dǎo)致細(xì)胞突變或抗體分泌能力下降，建議定期克隆化篩選或從液氮凍存管中復(fù)蘇早期代數(shù)細(xì)胞。
• 種屬特異性：作為小鼠來源細(xì)胞系，其分泌的抗體為鼠源單克隆抗體，用于人體研究時(shí)可能引發(fā)免疫原性，需通過人源化改造降低異源性。
• 實(shí)驗(yàn)倫理：涉及動(dòng)物來源細(xì)胞的研究需遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理規(guī)范，尤其在體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)中需評(píng)估動(dòng)物福利。